激光共聚焦掃描顯微鏡主要有四部分組成:1、顯微鏡光學(xué)系統。2、掃描裝置。3、激光光源。4、檢測系統。整套儀器由計算機控制,各部件之間的操作切換都可在計算機操作平臺界面中方便靈活地進(jìn)行。
1、顯微鏡光學(xué)系統
顯微鏡是顯微鏡的主要組件,它關(guān)系到系統的成象質(zhì)量。顯微鏡光路以無(wú)限遠光學(xué)系統可方便地在其中插人光學(xué)選件而不影響成象質(zhì)量和測量精度。物鏡應選取大數值孔徑平場(chǎng)復消色差物鏡,有利于熒光的采集和成象的清晰。物鏡組的轉換,濾色片組的選取,載物臺的移動(dòng)調節,焦平面的記憶鎖定都應由計算機自動(dòng)控制。
2、掃描裝置
激光共聚焦掃描顯微鏡使用的掃描裝置在生物領(lǐng)域一般為鏡掃描。由于轉鏡只需偏轉很小角度就能涉及很大的掃描范圍,圖象采集速度大大提高,512×512畫(huà)面每秒可達4幀以上,有利于那些壽命短的離子作熒光測定。掃描系統的工作程序由計算機自動(dòng)控制。
3、激光光源
顯微鏡使用的激光光源有單激光和多激光系統。多激光器系統在可見(jiàn)光范圍使用多譜線(xiàn)氬離子激光器,發(fā)射波長(cháng)為457nm、488nm和514nm的藍綠光,氦氖綠激光器提供發(fā)射波長(cháng)為543nm的綠光,氦氖紅激光器發(fā)射波長(cháng)為633nm的紅光,新的405nm半導體激光器的出現可以提供近紫外譜線(xiàn),但是小巧便宜而且維護簡(jiǎn)單。
4、檢測系統
激光共聚焦掃描顯微鏡為多通道熒光采集系統,一般有三個(gè)熒光通道和一個(gè)透射光通道,能升級到四個(gè)熒光通道,可對物體進(jìn)行多譜線(xiàn)激光激發(fā),樣品發(fā)射熒光的探測器為感光靈敏度高的光電倍增管PMT,配有高速12位A/D轉換器,可以做光子計數。PMT前設置針孔,由計算機軟件調節針孔大小,光路中設有能自動(dòng)切換的濾色片組,滿(mǎn)足不同測量的需要,也有通過(guò)光柵或棱鏡分光后進(jìn)行光譜掃描功能的設置。